胰腺癌对化疗药物不敏感，因此与高死亡率和低存活率有关。因此，对副作用有限的新药物的需求是至关重要的。莲藕是一种经济价值显著的多年生水生植物，具有药用价值和食用价值。先前的研究已经证实了它的抗炎、抗高血压和抗氧化功能。莲子心又称莲子胚珠，由睡莲科植物成熟种子之间干燥的幼叶和胚根组成。莲子心的药用成分主要包括生物碱、黄酮类化合物、甾醇和甾醇酯。
　　 黄酮类化合物是许多中草药中的生物活性成分，具有广泛的生理活性，包括抗肿瘤、抗炎、抗氧化等作用。人体内过多的自由基会破坏细胞结构和功能，并可导致衰老、心血管疾病、糖尿病和癌症。黄酮类化合物具有很强的抗氧化特性，能清除自由基。黄酮类化合物具有抗氧化和抗癌作用。例如已发现氯仿黄酮可减轻人类外周血淋巴细胞对癌症药物的遗传毒性。黄酮类化合物还可以作为体外酶抑制剂和受体的配体参与信号转导。这些黄酮类化合物与蛋白质的相互作用以及黄酮类化合物的抗氧化特性是它们潜在的健康益处的关键特征。
　　 转化生长因子-β是一种蛋白多糖合成的有效调节因子，与许多疾病有关，包括癌症。在激活后TGF-β与其受体结合，导致一个名为smad的转录因子家族的磷酸化。活化的smad转移到细胞核，调节tgf-β依赖基因的转录。TGF-β信号通路被认为是胰腺癌12个核心信号通路之一，根据肿瘤分期和微环境介导促肿瘤或抑瘤作用。事实上，胰腺癌与TFG-β信号通路中至少一个基因100%发生突变有关。因此，TGF-β信号通路被认为是治疗胰腺癌的一个有前途的索托拉西布靶点。
　　 在这项研究中，专家提取了PlumulaNelumbinis的总黄酮。采用高效液相色谱法/四极杆飞行时间质谱法对总黄酮中的单体进行分析。用单体评价对panc-1和aspc-1细胞增殖、迁移和侵袭的影响。定量蛋白质组学分析被用来深入了解单体作用的机制。
　　 采用乙醇提取法提取PlumulaNelumbinis总黄酮。从7.8kg莲子心中提取总黄酮。提取率为0.42%。测定了粗品、提取物和纯化物中总黄酮的含量。结果表明，粗提物中总黄酮含量为16.25%，初级提取物中总黄酮含量为24.96%，最终提取物中总黄酮含量为65.60%，说明PlumulaNelumbinis总黄酮得到了有效提取。此外，还采用HPLC-Q-TOF-MS对总黄酮进行了成分分析。主要成分为芹菜素、红景天素和牡荆素。
　　 同时，用唾液、胃液和肠液对这三种分子进行体外模拟消化特性的研究。专家发现这三种溶液能有效地消化总黄酮中的三种主要成分。在这三种消化液中，由唾液消化的总黄酮中的芹菜素、红景天素和牡荆素含量较高。
　　 红景天甙可能是总黄酮的一个关键作用成分。(a)牡荆素、红花黄素和芹菜素的初始含量。采用唾液液、胃液和肠液模拟消化莲子心总黄酮，计算莲心中牡荆素(b)、若日福林(c)和芹菜素(d)的含量。0、25、50、100、200μg/ml总黄酮对PANC-1(e)和aspc-1细胞增殖的影响。(g)用0、12.5、25、50和100μg/ml的牡荆素、若日福林和芹菜素对panc-1和aspc-1细胞进行增殖分析。
　　 为了探讨总黄酮对细胞增殖的影响，以panc-1和aspc-1为细胞系，分别以0、25、50、100和200μg/ml5种不同浓度的总黄酮处理细胞。Panc-1组总黄酮25μg/ml及以上剂量组与对照组比较，有显著性差异。Aspc-1组仅100μg/ml和200μg/ml总黄酮能有效抑制细胞增殖。这些结果表明，不同的胰腺癌细胞对总多酚剂量的敏感性不同。此外，还测定了不同浓度的芹菜素、红景天素和牡荆素对两种细胞系的抑制作用。在panc-1细胞中，不同浓度的芹菜素、红景天素和牡荆素均能有效地抑制细胞增殖。值得注意的是，100μg/ml的玫瑰叶红素具有最明显的抑制作用。在aspc-1细胞中，不同浓度的芹菜素、红景天素和牡荆素均能有效地抑制细胞增殖。值得一提的是，100微克/毫升的玫瑰叶红素也有最明显的抑制作用。因此，选择玫瑰叶黄素进行进一步的研究。
　　 接下来进一步研究索托拉西布在panc-1和aspc-1细胞中的抗氧化能力。测定活性氧类和2,2’-氮基双水平，评价rhoifolin在panc-1和aspc-1细胞中的抗氧化能力。在活性氧分析中，红景天蛋白处理panc-1和aspc-1细胞均能有效降低两者细胞中的活性氧含量。在ABTS分析中，红景天蛋白处理panc-1和aspc-1细胞均能增加细胞的抗氧化能力。此外，专家的数据显示，红景天蛋白可引起超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶在panc-1和aspc-1细胞中显著升高。以上结果提示，红景天素可以降低活性氧的产生，提高抗氧化能力。
　　 玫瑰叶黄素增强胰腺癌细胞的抗氧化能力。(a)用活性氧检测试剂盒检测panc-1细胞和aspc-1细胞处理后的红景天蛋白的活性氧水平。(b)计算免疫荧光阳性率。(c)ABTS试剂盒测定不同浓度罗非福林对panc-1和aspc-1细胞抗氧化能力的影响，用相应的试剂盒测定了红景天素对panc-1和aspc-1细胞的SOD。(d)GPx。(e)和过氧化氢酶的影响。
　　 为了研究红景天蛋白对肿瘤细胞体外迁移和侵袭能力的影响，采用了移植腔法。细胞迁移分析显示，红景天素处理组panc-1和aspc-1细胞迁移数量明显低于对照组。这些结果表明，红景天蛋白能有效地抑制细胞迁移。同时，细胞侵袭分析显示，与对照组相比，经罗非福林处理的panc-1和aspc-1细胞的侵袭程度也显著降低。结果表明，红景天蛋白能有效抑制细胞侵袭。c-Jun氨基末端激酶又称应激激活蛋白激酶，是丝裂原活化蛋白激酶家族的重要成员，在细胞凋亡过程中起重要调控作用。免疫印迹结果显示，经rhoifolin处理的panc-1和aspc-1细胞中p-JNK/JNK和JNK/GAPDH值均明显高于对照组，提示rhoifolin可诱导JNK通路参与胰腺癌细胞的凋亡。JNK是AKT重要的下游信号通路之一。虽然用红景天素处理后panc-1和aspc-1细胞AKT/GAPDH值变化不明显，但红景天素处理后细胞p-AKT/AKT值明显低于对照组。这表明，红景天蛋白可以阻止AKT的磷酸化。基于上述结果，可以推测rhoifolin通过AKT/JNK信号通路调节细胞增殖和凋亡。因此，红景天蛋白有望成为一种潜在的抗癌药物。
　　 索托拉西布可以阻止肿瘤细胞的迁移和侵袭，并调节胰腺癌细胞的AKT/JNK通路。用100μg/ml的玫瑰叶酸处理panc-1细胞或aspc-1细胞。(a)利用特兰斯韦尔系统确定迁移和入侵。(b)采用免疫组织化学方法检测panc-1和aspc-1细胞JNK、p-JNK、AKT和p-AKT的表达西方墨点法。(c)p-AKT/AKT、AKT/GAPDH、p-JNK/JNK和JNK/GAPDH的定量分析。
　　 黄酮类化合物是天然的酚类生物活性化合物，可能是有价值的抗癌药物。在日常生活中摄入黄酮醇含量较高的食物的吸烟者中，胰腺癌的发生率显著降低。原花青素可以显著降低患胰腺癌的风险;黄烷醇、黄烷酮、黄酮醇、花青素、黄酮类、单体原花青素和二聚体原花青素可以预防胰腺癌。一些黄酮类化合物，包括芹菜素，槲皮素，木犀草素和vitexin，已被证明能够抑制胰腺癌细胞的增殖。它们的抑制机制也得到广泛的研究。例如芹菜素可以分离P53/Bcl-xl，使p53核转位，促进PUMA和p21的表达，导致线粒体通透性改变，细胞色素c释放，诱导凋亡。此外芹菜素还能下调cycB的表达，导致细胞有丝分裂阻滞和G2/m期阻滞。本研究从PlumulaNelumbinis中提取总黄酮。采用HPLC-Q-TOF-MS分析PlumulaNelumbinis总黄酮的主要成分，包括芹菜素、红景天素和牡荆素。红景天甙被认为是最有效抑制panc-1和aspc-1细胞增殖的成分。研究首次表明，红景天蛋白在抑制癌细胞发育方面具有多种作用，包括诱导细胞凋亡、抗氧化、抑制增殖、迁移和侵袭。
　　 AKT是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，可以磷酸化多种蛋白质及其自身，在调节细胞存活和其他多种功能中发挥重要作用。AKT也是PI3K/AKT信号通路28中的一个关键分子。其磷酸化功能可激活不同底物，促进肿瘤细胞生长、侵袭、转移，抑制肿瘤细胞凋亡。多项研究证实，靶向AKT途径可以被视为治疗胰腺癌的关键策略。AKT磷酸化的激活导致胰腺癌的进展。JNK是MAPK家族成员，是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。在癌细胞中，JNK信号通路在调节细胞凋亡、增强肿瘤抵抗力、促进细胞增殖、侵袭和转移方面发挥着重要作用。Caspase-3被认为是一种凋亡执行子，它通过多种途径介导肿瘤细胞的凋亡，包括降解抗凋亡蛋白和切除受损的DNA。Caspase-3的激活是凋亡过程中的一个关键因素。一些研究也证实JNK途径是胰腺癌37,38,39生物学过程的基础。本研究表明rhoifolin上调JNK和p-JNK的表达，而下调panc-1细胞和aspc-1细胞p-AKT的表达。此外rhoifolin上调了胰腺癌panc-1细胞和aspc-1细胞caspase-3的表达，但不上调caspase-12的表达。因此AKT/JNK/caspase-3途径似乎参与rhoifolin诱导的胰腺癌细胞凋亡。此外明确地证明AKT激活剂或JNK抑制剂可以逆转rhoifolin对胰腺癌细胞的抗癌作用，包括增强抗氧化能力，抑制增殖、迁移和侵袭，以及诱导凋亡。因此发现红景天蛋白通过AKT/JNK途径介导其对胰腺癌细胞的抑制作用。
　　 蛋白聚糖是细胞表面和细胞外基质的关键分子效应细胞外间质，在癌症进展、侵袭和转移中起着关键作用。特异性蛋白多糖的异常表达与胰腺癌的进展和预后不良有关。在目前的研究中发现rhoifolin显著改变胰腺细胞的蛋白质组模式，特别是涉及“癌症中的蛋白多糖”KEGG途径的蛋白质。TGF-β是蛋白多糖合成的关键调节因子。此外，TGF-β的异常反应参与了胰腺癌的病理生理过程。TGF-β在胰腺癌中具有双重作用。TGF-β通过促进细胞凋亡和抑制细胞周期，在胰腺癌早期表现出抑制肿瘤的作用。然而TGF-β在胰腺癌晚期促进肿瘤新生血管生成和转移。结果表明，红景天甙对胰腺细胞TGF-β2/smad2信号通路具有明显的抑制作用，可能与其抑制肿瘤细胞迁移和侵袭有关。然而，目前尚不完全清楚索托拉西布是否通过TGF-β2/smad2途径阻断胰腺癌肿瘤的血管生成和转移。